The Hong Kong University of Science and Technology
Centre for Chinese Medicine R&D
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健妇胶囊对雌激素、孕激素和促红细胞生成素水平的影响
香港科技大学中药研发中心
Center for Chinese Medicine R&D，The Hong Kong University of Science and Technology
本次研究主要通过细胞活性实验，研究健妇胶囊补肾活血养血、调经止带的功效。首先选择人源胚胎肾细胞HEK293T细胞系，构建检测促红细胞生成素（EPO）表达调控立体研究模型，并在该细胞转染缺氧反应组件-荧光素酶（pHRE-luciferase）载体，从而研究“健妇胶囊”的补血养血功效；选择MCF-7人乳腺癌细胞，构建可检测雌激素反应元-荧光素酶活性测定（ERE-luciferase）模型，测试“健妇胶囊”对雌激素（estrogen）反应水平的影响；另外选择lshikawa人子宫内膜腺癌细胞，测试“健妇胶囊”对孕激素受体（progesterone receptor）表达的影响。从三个方面的研究评估“健妇胶囊”的功效。
一、实验材料：
“健妇胶囊”由香港远大制药厂出品，中成药注册编号HKP-04717，生产批号：141101
【成份】：海狗肾2%、鹿胎10%、山茱萸2%、当归10%、白术（炒）10%；韭菜子8%；鹿角霜；龙骨。
【性状】：为硬胶囊，内容物为淡棕色或棕色颗粒粉末；味微辛、苦。
【功能主治】：补血养血，活血化瘀，调经止带。
二、实验方法：
1. 用MTT法，测试健妇胶囊对细胞的毒性实验
图1.健妇胶囊对HEK293细胞毒性测试
图2.健妇胶囊对MCF-7细胞毒性测试
用统计学方法分析结果显示：健妇胶囊（JFJN）的不同药物浓度对于MCF-7和HEK293T细胞，体外实验显示无毒性。
2. 缺氧反应组件（Hypoxia response element,HRE）研究健妇胶囊对促红细胞生成素（Erythropoietin,EPO）水平影响
图3.健妇胶囊对促红细胞生成素（EPO）表达调控作用
结果分析表明：健妇胶囊对促红细胞生成素（EPO）效用具有剂型依赖性。
3.用MCF-7细胞测试健妇胶囊对雌激素（Estrogen）水平的影响
图4.健妇胶囊对雌激素水平的表达调控
数据分析表明：健妇胶囊对雌激素有调控作用，其水提取物对ERE的激活强度，呈现剂量依赖关系。
4.用Ishikawa细胞测定胶囊对孕酮受体（Progesterone receptor,PR）表达的影响
图5.健妇胶囊对孕酮受体（progesterone receptor，PR）水平的调节
结果说明：健妇胶囊通过实时逆转录的定量测定聚合酶链反应，与对照组相比显示在健妇胶囊浓度为1mg/ml时，可增强孕酮受体（progesterone receptor ,PR）mRNA在ISHIKAWA细胞的表达。
三、 实验结果：
根据以上实验数据：
1. 健妇胶囊的水提取物对我们使用的三种细胞株 HEK293T、MCF-7 和 Ishikawa 细胞没有显示细胞毒性。
2. 健妇胶囊对人源胚胎肾细胞 HEK293T 有促血红细胞素（EPO）生成的作用，显示出具有补血功效，其补血效用有剂量依赖性：量越大，补血功效越强。
3. 利用 MCF-7 细胞测定健妇胶囊的雌激素作用，从我们所得到的数据表明，健妇胶囊对雌激素有调控作用，其水提取物对 ERE的激活呈现剂量依赖关系。
4. 利用Ishikawa 细胞模型，测定健妇胶囊对孕酮受体 (progesterone receptor，PR)表达的影响结果说明：健妇胶囊通过实时逆转录的定量测定聚合酶链反应，与对照品相比, 显示：健妇胶囊浓度为 1 mg/ml 时, 可增强孕酮受体 (progesteronereceptor，PR) mRNA 在 Ishikawa 细胞的表达。
本研究利用细胞分子生物学，对健妇胶囊有促血红细胞素（EPO）生成功效研究，证明其具有补血功效；对雌激素反应元 ERE 的激活，证明健妇胶囊对雌激素的调控作用；另外健妇胶囊对孕酮受体表达作用，证明健妇胶囊具有临床治疗生殖激素相关障碍的效果。
